Expone: Dr. Pablo López

Fecha: Agosto 2013

La presentación se va basar en estos cuatro puntos donde básicamente se va hablar de la genética del cáncer y las mutaciones  genéticas. Se va a basar la charla esencialmente en la hibridación in situ fluorescente FISH donde vamos a ver ahora algunas consideraciones técnicas y que hay que conocer para poder llevarlas a cabo de una manera efectiva, posteriormente vamos a ver alguna aplicación clínica de FISH en la oncología en general y cerramos en algunas consideraciones del HER2 en el cáncer gástrico.

El cáncer es un grupo de las enfermedades la cual se caracteriza por un funcionamiento anormal de uno o más genes que llevan a la proliferación celular que no va a tener ni control ni coordinación generando estas tres características que todos conocemos como es la proliferación, la invasión a los tejidos adyacentes o las metástasis a tejidos distantes.

Habitualmente las células normales cuando surge un evento genético adverso es capaz de reparar ese defecto y llevar a la célula a la apoptosis, cuando escapa a esos mecanismos de control se genera partiendo de una célula que adquiere una ventaja proliferativa, un clon celular, que va a generar la neoplasia. O sea que son eventos genéticos sucesivos, y son a nivel celular y a nivel clonal, pudiendo este evidenciar que a partir de un evento se genera toda una clona igual o posteriormente a esa primera adquisición que genera una ventaja proliferativa, se van agregando nuevos eventos genéticos, que van caracterizando a diferentes sub clones. Entonces nosotros hablamos de una evolución clonal cuando se van adquiriendo diferentes alteraciones genéticas que van caracterizando a los sub clones.

Para lograr esas alteraciones genéticas, se producen por diferentes mecanismos, las mutaciones puntuales habitualmente son un cambio de una base por otra que pueden generar cambios en la expresión de determinados genes.  En el caso de que sean proto-oncogenes pueden ser que sean casos de sobreexpresión de determinadas proteínas que van a estimular el crecimiento de la proliferación celular pero también hay otros elementos como la pérdida de material que pueden también llevar a una desregulación de genes que estimulan la proliferación celular. Como es conocido el caso de las traslocaciones que lo que hacen es cambiar la disposición en la cual se encuentran determinados genes. Esto hace que determinados genes regulados de determinada manera, en su sitio original, al cambiar de posición se encuentran en un ambiente génico mucho más permisivo que favorece la trascripción de esos genes  por lo cual ya sea por la adyacencia de promotores o potenciadores, generan en esa caso una hiperproducción de genes puede llevar a una proliferación celular no controlada.

Quiero resaltar las amplificaciones que es el caso más frecuente cuando consideramos al HER2 neu. Las amplificaciones se pueden dar por polisomías, o amplificaciones en Tandem que hacen que un segmento de gen se va a replicar numerosas veces y eso puede tener como efecto una sobreexpresión genética, una sobretranscripción de ese producto como consecuencia de una sobreexpresión a nivel proteico. Esto es un punto que quiero resaltar en relación a lo que la Dra. Musto recién expuso, que la inmunohiastoquímica es una técnica que nosotros vamos a evidenciar, una proteína que está a nivel celular y con el FISH vamos a evidenciar son aquellas alteraciones genéticas que pueden llevar a una sobreprotección de esa proteína. Habitualmente lo que ocurre en estos casos, en el cáncer gástrico HER2 neu positivo, esa sobreprotección proteica esta generada por una amplificación a nivel génico. En algunos casos hay  alguna discordancia donde la presencia de una amplificación no se expresa por una sobreexpresión a nivel proteico.

Hay una clasificación de los genes vinculados al desarrollo tumoral, pudiéndose clasificar en dos grandes grupos, los oncogenes y los genes supresores de tumores y dentro de los oncogenes; partiendo desde el exterior celular al interior y se pueden alterar factores genéticos por los mecanismos que ya vimos, receptores de factores de crecimiento que es el caso que nos compete hoy, los receptores humanos epidérmicos. Pueden alterarse las proteínas transmisoras de señales, habitualmente estos receptores desencadenan cascadas de fosforilación que generan una activación a nivel genético estimulando a su vez factores de transcripción que bien pueden estar alterados o reguladores del ciclo celular. En este caso lo que vamos a ver hoy es vinculado a la amplificación de receptores de factores de crecimiento.

Técnica del FISH

Ahora nos vamos a centrar en la técnica del FISH y cómo se desarrolla. Esta herramienta se suele denominar citogenética molecular, molecular porque utilizar una sonda que es una secuencia de ADN, que va a hibridar, ser va a pegar complementariamente a un sitio especifico que yo conozco, esa sonda va aser marcada con fluorescencia de manera que la evidenciada de esa señal era captada a través de un microscopio de fluorescencia. Esta sonda se va a hibridar por complementariedad de bases a una secuencia especifica que yo quiero buscar. O sea que yo previo al desarrollo de la técnica de FISH debo saber cuál es el sitio que yo quiero buscar. Esa técnica se puede desarrollar tanto en células que se encuentran en interfase o sea que le material genético va a estar descompactado a nivel nuclear, eso va a tener a su vez determinadas características técnicas en la visualización de esa señalo en metafases que ya es un grado de concentración mayor del ADN en el cual la señal en ese caso es mucho más restringida y podemos ubicarlo sobre un cromosoma particular. Esto también se puede realizar con células en suspensión o en tejido solido que habitualmente vemos en cáncer gástrico para la detección de HER2 neu.

La sonda es un fragmento de ADN o ARN que tiene la capacidad de unirse a una región especifica de un ADN objetivo. Como consecuencia, tenemos que saber que alteración genética vamos a buscar para esa determinada patología, eso requiere conocimiento por parte del médico que solicita de los defectos más relevantes. No podemos solicitar un FISH para una patología hematológica o una leucosis por ejemplo. Es una herramienta que permite detectar las secuencias de ADN complementarias y son sondas bastante grandes, habitualmente la sonda marcada por desnaturalización e hibridización a la región complementaria se va a pegary evidenciamos dos señales a través del microscopio.